細胞房工作守則及注意事項

一、 常規操作
1. 穿著實驗服。自己的白大衣或厚外套，可脫在門外的衣帽架上。
　　2. 穿著拖鞋。在緩沖間換下自己的鞋子，盡量避免在緩沖間走動、停留。
　　3. 細胞房zui多可4個人同時使用。盡量避免在內長時間逗留、交談。
二、 培養箱使用規則
1. 從培養箱取放物品前，用酒精清潔雙手(或手套)，盡量縮短開門時間和減少開門次數。
　　注： 培養箱中的空氣是經過過濾的潔凈空氣。長時間敞開或頻繁開關培養箱，容易造成污染。
　　2. 培養瓶皿放入培養箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
　　3. 2-3人共用一層培養箱，按預定位置擺放培養器皿，方便查找，以免長時間敞開培養箱。
　　4. 普通培養中的細胞，若非實驗需要，每瓶/板細胞每天只需要觀察生長狀態一次，2人以上共用的細胞，可約好時間一起觀察。
　　注：頻繁將細胞拿出觀察，容易給培養箱造成污染，同時也會影響細胞生長條件的恒定。
三、 顯微鏡使用規則
1. 顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。
　　2. 離開細胞房時或較長時間不需使用時，及時關上電源，延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。
四、 超凈臺相關操作規則
1. 超凈臺使用遵循預約原則。無預約者若有必要在他人預約時段內使用，需先征得預約者的同意，否則應無條件讓出工作臺，以免耽誤他人實驗。
2. 超凈臺使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區消毒，所有物品放入超凈臺內使用前均應消毒。
3. 點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應占瓶高1/3-2/3。
　　注： 消毒用75%的酒精，酒精燈用95%的酒精，向噴壺或燈內添加酒精時請留意。
　　注： 酒精和酒精棉球由值日生負責補給，發現細胞房內存放量不足時請及時通知值日生。
4. 超凈臺中應擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時存放廢棄物，實驗結束后將杯內垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。
　　注： 將廢棄的槍頭、管子內的殘留液體打(倒)入廢液杯后再棄入廢品杯中，以免垃圾桶內留有大量培養液滋生細菌。
5. 可回收的移液管、離心管、培養瓶皿等，放入裝有清水的塑料桶中浸泡，桶內需有足量的清水以沒過浸泡物品。
　　注： 可回收器皿必要時先初步涮洗后再放入桶內，尤其是培養瓶或血清管中有大量高營養的液體殘留時，容易使桶內的清水長菌。
　　保證浸泡的瓶、管內*被清水充滿，而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底。
　　塑料桶內物品由值日生每天負責送去清洗，使用者實驗結束后若發現桶已裝滿，請通知值日生或順手將塑料桶帶出細胞房。
6. 裝培養液的瓶子、配培養液的器皿勿放入塑料桶內浸泡！應由使用者本人及時清洗晾干備用。
　　注： 因桶內物品通常要浸泡幾小時以上才送去清洗，此時細菌可能已在桶中生長并釋放內毒素。細菌內毒素很難通過常規濕熱滅菌步驟去除干凈，即使干烤也不能保證其*失活。內毒素對細胞生長及多種實驗均有較大影響。
洗滌程序：洗潔精洗凈，清水沖十次以上去除洗滌劑殘留，然后沖去離子水3次，再用雙蒸水1次，倒置于器皿柜中晾干。關上器皿柜的門防塵。
五、 培養液、試劑等相關操作規則
1. 從冰箱取放物品動作要迅速，關門時要檢查門是否關好。按類別存放試劑。
2. 培養液母液是公用，由值日生負責配制，長期存放于-20℃。使用時按比例加入血清配成培養液工作液，打開使用后的母液存放于4℃，要注意避免污染。發現4℃存放的培養液量不足時及時從-20℃中預解凍，若-20℃中已沒有儲備，請及時通知值日生。
　　3. 分裝好的血清長時間保存于-20℃，使用前放于4℃預解凍。從-20℃取用血清者需登記，并在血清管上簽上使用者名字，若使用別人解凍的血清需征得同意以免耽誤他人實驗。按需解凍，避免反復凍融。
　　4. 原則上解凍好的血清應全部配成含血清的培養基備用，若有剩余，則暫存于4℃并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清，以免交叉污染。
六、 值日生工作職責
1. 每周值日生時間從周六開始，至下周五結束。
　　2. 值日周開始時需做的事情：在周六、日或之前準備好滅菌的槍頭、離心管、干烤好的玻璃器皿，供未來一周的使用。配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，給細胞房內添加足夠的95%乙醇供酒精燈使用。
　　注： 新離心管滅菌前，先用去離子水過2-3次，再用雙蒸水沖1次，烘干后用牛皮紙包好、滅菌。
　　注：75%的酒精可用750ml 95%的酒精加去離子水至950ml配制而成。
　　3. 值日周內每天需做的事情：開大紫外燈消毒細胞房15-30min；將裝滿浸泡物品的塑料桶拎出細胞房送洗，并將空桶放回細胞房；更換垃圾袋；檢查培養箱內水量是否足夠；檢查滅菌物品的儲備情況，以便及時補充；檢查培養液母液、血清、酒精等公用試劑的儲備情況。
　　4. 值日周結束前需完成的事情：星期五或前后一天內打掃細胞房。包括拖地，擦桌子、吊柜、清潔和整理抽屜，擦超凈臺、冰箱及桌上的儀器，給水浴鍋加水或換水，洗細胞房的實驗服和拖鞋，紫外消毒細胞房。切記給培養箱換MilliQ水，保證水質清潔！
　　注：若上周值日生及時給培養箱內水槽加足水，根據經驗未來一周內培養箱不會干水，但值日生仍應經常檢查，以便及時發現異常情況。
　　5. 每2周清潔一次培養箱：先將培養箱中的物品取出暫存于超凈臺內，對于比較敏感的細胞可以暫存于404細胞房的培養箱；將培養箱內的不銹鋼板取出，包括4塊橫板和左右2塊立著的架子，用酒精棉球清潔鋼板和培養箱內壁；打開培養箱清潔內壁時動作要迅速，避免長時間敞開門使得大量不潔凈空氣進入，縮短過濾器的壽命；用紫外燈照射培養箱內部15min，手提紫外燈放入培養箱前要用酒精棉擦拭干凈。
　　6. 配制培養液母液：培養液有RPMI1640和DMEM兩種，配方見404公共配液房；配制培養基要提前干烤量筒、燒杯、250ml血清瓶，濕熱滅菌濾器、血清瓶瓶蓋，國產濾膜使用前用MilliQ水浸泡15min以上或過夜。
七、常用溶液的配制
1. RPMI 1640：干粉一包，碳酸氫鈉 2.0g，Hepes 2.38g，青霉素100u/ml，鏈霉素100ug/ml，攪拌1-2小時后調節pH值至7.2，定容至1L，過濾滅菌分裝；
　　2. DMEM：干粉一包，碳酸氫鈉 3.7g，Hepes 2.38g，丙酮酸鈉110mg，青霉素100u/ml，鏈霉素100ug/ml，攪拌1-2小時后調節pH值至7.2，定容至1L，過濾滅菌分裝；
　　3. 胰蛋白酶：用D-Hanks配制，濃度為0.25％(W/V), 攪拌2小時后調節pH值至7.2，定容至1L，過濾滅菌分裝；
　　4. 青霉素：80萬單位/瓶，加入4ml PBS，配成濃度為200000U/ml的母液；
　　5. 鏈霉素：按質量體積比配制，用PBS配成濃度為200mg/ml的母液。