如何拯救被污染的細胞

 夏天到了，細胞更容易被污染，很多養(yǎng)細胞的朋友在這方面困惑頗多，今天針對貼壁生長的細胞談談。 在討論之前，大家首先要有一個概念，即潔凈區(qū)，并不是沒有細菌，而是細菌的數量非常少，在我們的潔凈操作臺里，并不是真正一個細菌都沒有的，所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作。盡量減少進入培養(yǎng)體系細菌的數量。 所以處理細菌污染的重要原則就是：無限地稀釋細菌的濃度，無限地減少細菌的數量！

對于細菌污染（常見為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌）；

污染處理流程

1、將污染的培養(yǎng)液倒掉，轉燒瓶口，加入10 mlPBS，適當晃動清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。轉燒瓶口。

2、繼續(xù)加入10mlPBS，同樣方法晃動，清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。

3、繼續(xù)加入5mlPBS，同樣方法洗瓶，主要是培養(yǎng)面，然后倒掉。

4、重復步驟3再洗。

5、重復步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

7、加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。

9、加入10ml培養(yǎng)液，加入2ml雙抗，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，5小時之后，倒掉培養(yǎng)基，加入PBS洗瓶兩次，然后加入胰酶消化，吹打后置于離心機800-1000r/min離心，然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

10、24h之后，視情況換液，若仍然污染嚴重，培養(yǎng)基渾濁，重復以上步驟，若看不到污染物，則繼續(xù)步驟1)、3）、4）、6）、8），然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

11、24h之后，若仍污染嚴重，可再重復一次，若還污染只能棄之（不過一般沒有出現這種情況），若鏡下不見污染物，則換液PBS洗瓶，正常培養(yǎng)。

若為霉菌或者真菌污染：

     加入兩性霉素B清洗和培養(yǎng)，終濃度一般為2.5μg/ml（在30μg/ml時會有細胞毒性）。另外也可以選擇在培養(yǎng)基里加3ug/ml的制霉菌素或放線菌素D。 其它操作同；

若為支原體污染有幾種支原體清除劑，

     1.BM-Cyclin（就是泰妙菌素+米諾環(huán)素）2.環(huán)丙沙星，這也是一種支原體較為敏感的抗生素，3.MRA，這個是商業(yè)化的支原體去除劑（Mycoplasma Removal Agent）是喹諾酮族抗生素的衍生物，使用后發(fā)覺，采用泰妙菌素和米諾環(huán)素的效果更好些，支原體耐藥率低，同時對細胞的抑制也較低。；

除此還是需要你在無菌觀念和無菌操作上下大功夫加強了，預防為主，還是要強調無菌操作，尤其注意血清的質量，這個是主要來源。

在操作的過程中，一定要小心操作動作，輕柔緩慢，切忌大動作魯莽。防止細胞脫落。當然如果你的細胞仍有富余或者凍存的，我還是建議你把污染的扔掉，再復蘇方便省事。這個拯救細胞還是主要針對你就只剩這一瓶細胞無路可退的時候。